Սահմանափակ մարսումն իրականացվում է թիրախ ԴՆԹ-ի մոլեկուլի ինկուբացիայի միջոցով սահմանափակող ֆերմենտներով. ֆերմենտներ, որոնք ճանաչում և կապում են հատուկ ԴՆԹ-ի հաջորդականությունները և ճեղքվում են հատուկ նուկլեոտիդներում՝ ճանաչման հաջորդականության մեջ կամ դրսում: ճանաչման հաջորդականությունը։
Ինչպե՞ս են մարսվում սահմանափակող ֆերմենտները:
Սահմանափակման ֆերմենտի մարսողության արձանագրություն
- Ավելացրեք բաղադրիչներ մաքուր խողովակի մեջ նշված հերթականությամբ՝ …
- Ինկուբացնել ռեակցիան մարսողության ջերմաստիճանում (սովորաբար 37 °C) 1 ժամ:
- Կանգնեցրեք մարսողությունը ջերմային ապաակտիվացման միջոցով (65 °C 15 րոպե) կամ 10 մՄ վերջնական կոնցենտրացիայի EDTA ավելացմամբ:
Արդյո՞ք սահմանափակող ֆերմենտը մարսում է ԴՆԹ-ն:
Սահմանափակող ֆերմենտները կարող են օգտագործվել նաև PCR արտադրանքների վրա համատեղելի ծայրեր ստեղծելու համար: … Բոլոր դեպքերում, մեկ կամ մի քանի սահմանափակող ֆերմենտներ օգտագործվում են ԴՆԹ-ի մարսման համար, որը ստացվում էհամատեղելի պլազմիդի մեջ ոչ ուղղորդված կամ ուղղորդված ներդիրում::
Ինչպե՞ս են գործում ԴՆԹ-ի սահմանափակող ֆերմենտները:
Ինչպե՞ս են գործում սահմանափակող ֆերմենտները: Ինչպես բոլոր ֆերմենտները, սահմանափակող ֆերմենտը գործում է ձևի ձևին համապատասխանեցնելով Երբ այն շփվում է ԴՆԹ-ի հաջորդականության հետ, որը համապատասխանում է ֆերմենտի մի մասին, որը կոչվում է ճանաչման վայր, այն փաթաթվում է ԴՆԹ-ի շուրջը և առաջացնում ԴՆԹ-ի մոլեկուլի երկու շղթաների ճեղքվածք:
Ի՞նչ ֆերմենտ է մարսում ԴՆԹ-ն:
Այս ֆերմենտները կոչվում են սահմանափակող էնդոնուկլեազներ կամ սահմանափակող ֆերմենտներ, և նրանք ի վիճակի են ճեղքել ԴՆԹ-ի մոլեկուլները այն դիրքերում, որտեղ առկա են հիմքերի որոշակի կարճ հաջորդականություն::
