Ստորև ներկայացնում ենք անուղղակի իմունֆլյորեսցենտային ներկման արձանագրության տարբեր քայլերի ակնարկ:
- Փորձի պլանավորում և նմուշի պատրաստում. …
- Նմուշի ամրագրում: …
- Բջջի թափանցելիություն. …
- Արգելափակում. …
- Հակամարմինների առաջնային ինկուբացիա. …
- Հակամարմինների երկրորդական ինկուբացիա. …
- Counterstain and Mounting.
Ինչպե՞ս եք իրականացնում իմունոֆլյորեսցենտը:
Բոլոր ինկուբացիոն քայլերը կատարվում են սենյակային ջերմաստիճանում:
- Լվացեք բջիջները երկու անգամ և պինցետներով զգուշորեն տեղադրեք ծածկը շրջված բջիջներով խոնավացված խցիկի մեջ:
- Աքսեք 4% ֆորմալդեհիդով 10 րոպե և լվացեք 3 ×։
- Թողնել 0,1% TX-100/PBS 15–20 րոպե և լվանալ 3 ×։
Ինչպե՞ս եք օգտագործում իմունոֆլյորեսցենտը բջիջում:
Իմունֆլյորեսցենտային արձանագրություն կպչուն բջիջների համար
- Սերմ 1–1.5 x104 բջիջ 4 խցիկ սլայդի մեկ հորատանցքում 500 մլ մշակութային միջավայրում: Ինկուբացնել 37°C ջերմաստիճանում 5% CO2.
- Բջջի սերմնավորումից 32–36 ժամ հետո, հեռացրեք բջիջների կուլտուրայի միջավայրը և ողողեք բջիջները 3 անգամ՝ օգտագործելով 500 µL 1X PBS:
Ի՞նչ է իմունֆլյորեսցենցիայի օրինակը:
Օրինակ, հետազոտողը կարող է ստեղծել առաջնային հակամարմիններ այծի մեջ, որոնք ճանաչում են մի քանի անտիգեններ, և այնուհետև օգտագործել ներկով զուգակցված նապաստակի երկրորդական հակամարմիններ, որոնք ճանաչում են այծի հակամարմինների մշտական շրջանը ( նապաստակի հակաայծային» հակամարմիններ).
Ի՞նչ օգուտ ունի իմունոֆլյորեսցենտային ներկումը:
Իմունոֆլյորեսցենտային (IF) ներկումը լայնորեն օգտագործվող տեխնիկա է կենսաբանական հետազոտությունների և կլինիկական ախտորոշման մեջ IF-ն օգտագործում է ֆլյուորեսցենտով պիտակավորված հակամարմիններ՝ հատուկ թիրախային անտիգենները հայտնաբերելու համար: Հետևելով պատկերազարդմանը, դա շատ անմիջական տեխնիկա է, քանի որ իրականում կարող եք ինչ-որ բան տեսնել:
