Պահպանեք դրանք Սառը: Իրավասու բջիջներ ստեղծելու գործընթացը դժվար է բջիջների սառը մնալու անհրաժեշտության պատճառով: Սա շատ կարևոր է, քանի որ բջիջները այնքան զգայուն և փխրուն են, մինչդեռ դրանք դառնում են կոմպետենտ Ջերմաստիճանը ցածր պահելը օգնում է խուսափել բջիջների մահից մշակման ընթացքում:
Ինչու են փոխակերպման փորձի ժամանակ սառույցի վրա պահվող ռեակցիաները:
Պլազմիդա-բջջային խառնուրդն այնուհետև կարճ ժամանակով տաքացվում է մինչև 45–50°C՝ թույլ տալով, որ ԴՆԹ-ն ներթափանցի բջիջ խաթարված թաղանթով: Այնուհետև տաքացվող խառնուրդը նորից դրվում է սառույցի վրա , որպեսզի պահպանի պլազմիդները բակտերիաների ներսում… Եթե պլազմիդի ԴՆԹ լուծույթում չափազանց շատ աղ կա, կարող է առաջանալ աղեղ՝ վտանգելով փոխակերպումը:
Ինչու՞ եք խողովակները դնում սառույցի վրա:
Ինչու՞ եք կարծում, որ մենք խողովակները դրեցինք սառույցի վրա: ԴՆԹ-ն բակտերիաների մեջ մտցնելու համար մենք պետք է դրանց մեջ անցքեր բացենք կալցիումի քլորիդով (CaCl2): … Անցքերը բացվեցին, որպեսզի ԴՆԹ-ն ներս մտնի, բակտերիաները բաց թողնում են: Եթե մենք նրանց սառույցի վրա չպահենք, նրանք «արյունահոսություն կանեն» մինչև մահ։
Ի՞նչ դեր ունի սառցե կալցիումի քլորիդը կոմպետենտ բջիջների պատրաստման գործում:
Կալցիումի քլորիդի ջերմային շոկի փոխակերպման գործընթացը խթանում է բակտերիաների բջիջները շրջակա միջավայրից ԴՆԹ-ի կլանմանը: … Սառցե CaCl2 լուծույթը հեշտացնում է ԴՆԹ-ի միացումը բջջի մակերեսին, որն այնուհետև մտնում է բջիջ ջերմային ցնցումից (3) կարճ ժամանակահատվածից հետո:
Ինչպե՞ս եք պահում իրավասու բջիջները:
Կոմպետենտ բջիջները պետք է պահվեն - 80°C ջերմաստիճանում: Երբ փորձարկվել է NEB 5-alpha Competent E. coli-ի (NEB C2987H) վրա, բջիջները կորցրել են TE-ի 94,5%-ը միայն 24 ժամ պահպանվելուց հետո -20°C-ում:
