Հենց հաջորդականության բավականաչափ պատճեններ ստացվեն PCR-ով, էլեկտրոֆորեզ օգտագործվում է բեկորներն ըստ չափսի բաժանելու համար:
Ինչպե՞ս են առանձնացվում ԴՆԹ-ի բեկորները:
Գելային էլեկտրոֆորեզ մեթոդ է, որն օգտագործվում է ԴՆԹ-ի բեկորները (կամ այլ մակրոմոլեկուլներ, ինչպիսիք են ՌՆԹ-ն և սպիտակուցները) բաժանելու համար՝ ելնելով դրանց չափից և լիցքից: … ԴՆԹ-ի բոլոր մոլեկուլները մեկ զանգվածի համար ունեն նույն քանակությամբ լիցք: Դրա պատճառով ԴՆԹ-ի բեկորների գելային էլեկտրոֆորեզը դրանք բաժանում է միայն չափի հիման վրա:
Ինչպե՞ս են ԴՆԹ-ի բեկորները առանձնացվում և մեկուսացվում ԴՆԹ-ի մատնահետքերի համար:
ԴՆԹ-ի բեկորները, որոնք ձևավորվել են սահմանափակող էնդոնուկլեազների օգտագործմամբ, առանձնացվում են գելային էլեկտրոֆորեզով(i) ԴՆԹ-ի բեկորները բացասական լիցքավորված մոլեկուլներ են: Այսպիսով, նրանք շարժվում են դեպի անոդ էլեկտրական դաշտի տակ միջին միջով: … (iv) ԴՆԹ-ի առանձնացված շերտերը կտրվում և հանվում են գելի կտորից:
Բաժանման ո՞ր մեթոդներն են օգտագործվում ԴՆԹ-ի մեկուսացման համար:
Օրգանական արդյունահանում ներառում է մի քանի տարբեր քիմիական լուծույթներում ավելացում և ինկուբացիա; ներառյալ լիզի փուլը, ֆենոլ քլորոֆորմի արդյունահանումը, էթանոլի նստեցումը և լվացման քայլերը: Օրգանական արդյունահանումը հաճախ օգտագործվում է լաբորատորիաներում, քանի որ այն էժան է և տալիս է մեծ քանակությամբ մաքուր ԴՆԹ:
Ինչու է էթիդիումի բրոմիդ EtBr-ն օգտագործվում գելային էլեկտրոֆորեզում:
Էթիդիումի բրոմիդը (EtBr) երբեմն ավելացվում է հոսող բուֆերին՝ ագարոզայի գելային էլեկտրոֆորեզով ԴՆԹ-ի բեկորների բաժանման ժամանակ: Այն օգտագործվում է, քանի որ մոլեկուլը ԴՆԹ-ին միանալուց և ուլտրամանուշակագույն լույսի աղբյուրովլուսավորվելուց հետո ԴՆԹ-ի ժապավենի ձևը կարելի է պատկերացնել:
